你在一种高效的克隆载体λYES（）后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育，一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接，这个接头由两个寡核苷酸5’-CGAGATTTACC和5’-GGTAAATC组成，其5’-末端均有磷酸基团，然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效，用2μg载体和0.1mg cDNA，你可以得到4×10 7 重组分子组成的文库

在反应混合物中载体与cDNA分子的比例是1:2。载体分子的长度是cDNA的40倍（43kb:1kb），但它们的分子量的比是20（20μg:0．1μg）。因此载体分子数只是cDNA分子数的一半。＄2μg的载体分子数是：4．2×10 10 。 因为这些载体产生4×10 7 重组子，所以产生重组子的效率约是： ＄将XhoI切割后的载体DNA与dTTT和DNA聚合酶保温，每个末端加上一个T。 5’-CT TCGAG-3’ 3’-GAGCT TC-5’ 受体寡核苷酸有与修饰后的载体端互补的单链尾巴。 5’-CT CGAGATTTACC-3’ 3’-GAGCT CTAAATGG-5’ 这允许修饰后的载体与修饰后的受体cDNA连接。 修饰后的载体末端不能自身连接，修饰后的cDNA同样也不能自身连接。＄载体和cDNA被修饰后只能允许载体与cDNA连接，反之亦然。这就大大地增强了重组分子的转化效率，因为消除了载体与载体的连接。＄修饰过的载体与受体cDNA连接在受体cDNA与载体的两个交接处产生xhoI位点（CTCGAG），这两个XhoI位点可将cDNA从重组质粒中切下，因为XhoI识别6bp的位点，在DNA上的切点相对较少，所以cDNA一般都能被完整切出。